• 首页
  • |
  • 天昊生物
  • |
  • 天昊诊断
  • |
  • 天昊健康


  • 免费服务热线
  • 400-065-6886
  • 电话:86(0)512-6295 9990
  • 传真:86(0)512-6295 9995
新闻中心

天昊目的区域甲基化MethylTarget检测技术动物领域再发新文

发稿时间:2018-04-12来源:天昊生物

继天昊MethylTarget多重目的区域甲基化富集测序技术动物领域首发文章后,南京农业大学动物健康与食品安全国际合作联合实验室利用MethylTarget技术近期又在《Comparative Biochemistry and Physiology》杂志上发表了母鸡补充甜菜碱通过DNA甲基化修饰来调控F1代公鸡下丘脑胆固醇代谢相关基因表达的文章。在恭喜客户又发表文章同时,我们再跟大家分享一下文章的研究思路。

英文题目:Dietary betaine supplementation in hens modulates hypothalamic expression of cholesterol metabolic genes in F1 cockerels through modification of DNA methylation

中文题目:母鸡补充甜菜碱可以通过DNA甲基化修饰来调控F1代公鸡下丘脑胆固醇代谢相关基因的表达

期刊名:Comparative Biochemistry and Physiology, Part B     影响因子 1.757

技术:MethylTarget多重目的区域甲基化富集测序技术

实验描述如皋黄羽蛋鸡随机分为基础饲料组和补充甜菜碱(0.5%)喂养组,喂养30天后,收集鸡蛋进行孵化,孵化的小鸡相同条件下生长56天,然后进行称重和取样。取颈静脉至肝素抗凝管,3000×g离心,4°C 10分钟制备血浆。解剖下丘脑,迅速在液氮中冷冻,然后储存在70°C作进一步分析。

研究目的: 

甜菜碱广泛应用于动物营养,作为蛋氨酸代谢中的甲基供体可通过基因表达调控实现营养重编程。目前不清楚蛋鸡喂养添加甜菜碱的饮食是否会影响F1代下丘脑的胆固醇代谢。

研究结果:

血浆和下丘脑胆固醇含量

母鸡补充甜菜碱并没有改变体重,但是F1公鸡血浆总胆固醇和高密度脂蛋白(HDL-C)浓度显著增加,此外,母鸡喂养甜菜碱可显著增加F1公鸡下丘脑总胆固醇和胆固醇酯含量(表3)。

 

 

2  体重;血浆中总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量;下丘脑中总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量。Tch:总胆固醇;HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇;LDL-C:低密度脂蛋白;BW, 体重; Free Cho:游离胆固醇;Cho Ester:胆固醇酯。

 

下丘脑胆固醇代谢基因的表达

母体喂养甜菜碱显著上调下丘脑SREBP1, SREBP2, LDLR 转录水平(图1A)和蛋白水平(图1B)。在甜菜碱组HMGCR mRNA水平增加,而CYP46A1 mRNA水平下降。此外,在甜菜碱组ACAT1APO-A1 mRNA水平均明显升高。


1 母体补充甜菜碱对F1代下丘脑胆固醇代谢基因表达的影响。A.下丘脑中SREBP1, SREBP2, HMGCR, CYP46A1, ACAT1, APO-A, LDLR mRNA水平。B. SREBP1, SREBP2, LDLR蛋白水平。

下丘脑甲基转移和神经肽相关基因的表达

母体喂养甜菜碱可在转录(图2A)和蛋白水平(图2B)上使BHMTDNMT1表达明显增加。此外,与对照组相比,甜菜碱组中下丘脑BDNFCRH mRNA水平表达显著下调,而NPY mRNA表达显著上调(图2C)。

 

 

2  补充甜菜碱对F1下丘脑甲基转移和神经肽相关基因表达的影响。A.下丘脑BHMT, DNMT1,DNMT3A mRNA表达水平。B. 下丘脑BHMT, DNMT1,DNMT3A 蛋白表达水平。C. BDNF, NPY, CRH mRNA表达水平。

下丘脑SREBP1, SREBP2, APO-A1等基因启动子CpG甲基化

对下丘脑基因组DNA进行了MethylTarget技术分析(mean coverage of> 600×),结果发现SREBP1, SREBP2, APO-A1等基因启动子区CpG岛甲基化状态受母体喂养甜菜碱调节。SREBP1(1350 to 1199), SREBP2 (2030 to 1612), APO-A1 (725 to 505)等基因的近端启动子区被用于甲基化分析(图3)。SREBP1启动子区段包括包含11CpG位点,这些CpG位点在甜菜碱组相对于对照组都是低甲基化。SREBP2启动子区段包括包含4CpG位点,其中3CpG位点在甜菜碱组相对于对照组是低甲基化的, 另外1CpG位点则是在甜菜碱组高甲基化。APO-A1启动子区段包括包含5CpG位点,这些CpG位点在甜菜碱组相对于对照组都是低甲基化。总的来说,SREBP1, SREBP2, APO-A1所检测的3个片段平均甲基化程度在甜菜碱组明显降低,这与它们的mRNA丰度呈负相关。

 

3  F1代下丘脑SREBP1,SREBP2,APO-A1基因启动子甲基化状态。 SREBP1 (1350–1199), SREBP2 (2030–1612)和APO-A1 (727–505) 5’侧翼启动子序列示意图。SREBP1, SREBP2, 和APO-A1 启动子区域平均甲基化状态(左图)和差异甲基化CpG位点(右图)。

总结

  •  甜菜碱组血浆总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇含量显著升高,下丘脑中总胆固醇和胆固醇酯含量显著升高。
  • 相应的,下丘脑SREBP2, HMGCR, LDLR, SREBP1, ACAT1,APO-A1等基因表达显著上调,CYP46A1表达上调,这些变化与BDNFCRH表达显著下调以及NPY表达显著上调有关。
  • 此外,参与甲基转移循环的基因也被调控,例如DNMT1BHMTmRNA和蛋白水平都显著上调,这与SREBP-1, SREBP-2,APO-A1等基因的启动子CpG甲基化明显修饰相关。
  • 这些结果表明,蛋鸡喂养甜菜碱可以通过启动子DNA甲基化修饰来调控F1代公鸡下丘中参与胆固醇代谢和脑功能相关基因的表达。

天昊创新性MethylTarget多重目的区域甲基化富集测序技术:

  • 性价比高:传统克隆测序一个片段10个克隆的价格,MethylTarget可以完成约60个片段的检测(检测深度为1000X,相当于1000个克隆)
  • 精确度高:基于二代测序数据检测甲基化程度,精确到单碱基分辨率,与基于测序的全基因组甲基化测序,RRBS数据有高度一致性
  • 精确定量:测序深度高达1000X,并可以进一步加深,相比于传统克隆测序,可以对位点甲基化程度进行准确定量
  • 技术灵活:基于多重PCR富集进行目标区域富集,可随时进行基因和位点的变化和改动,并且可以获得每个片段的甲基化单倍型

Copyright 2012-2018 天昊基因科技(苏州)有限公司    秒速时时彩www.ashleyfolk.com版权所有    苏ICP备17064027号-1
友情链接:秒速时时彩官网  秒速时时彩开奖直播  秒速时时彩注册  秒速时时彩开奖直播  秒速时时彩开奖直播  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!